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海洋生物dna的抽样(dna抽提及检测实验报告)

来源:www.shuishangwuliu.com   时间:2023-06-26 13:24   点击:271  编辑:jing 手机版

1. dna抽提及检测实验报告

可利用分子大小不同,碱基组成的差异以及质粒DNA的超螺旋共价闭合环状结构的特点来进行。

碱基性法抽提效果良好,既经济且得率较高。抽提到的质量DNA可用于酶切、连接和转化。

对于分子量较大拷贝较少对的质粒DNA,由于DNA片段较大易于损伤断裂,因此选用吕华铯密度超高离心法抽提DNA,且具有纯度高、步骤少、方法稳定且获得的质量DNA是超螺旋构型等特点。

对于高拷贝数质粒,用少量制备法抽提质粒DNA就有足够量可用于基因操作。

2. dna抽提试剂

提取仪是应用配套的核酸提取试剂来自动完成样本核酸提取工作的仪器,广泛应用在疾病控制中心、临床疾病诊断、输血安全、法医学鉴定、环境微生物检测、食品安全检测、畜牧业和分子生物学研究等多种领域。PCR仪一般指基因扩增仪,要用于用于科研及临床的基因扩增、定性PCR基因扩增、荧光/酶免终点定量DNA基因扩增、基因芯片等其他基因分析应用的基因扩增等。

  PCR仪用于科研及临床的基因扩增,定性PCR基因扩增,荧光/酶免终点定量DNA基因扩增,基因芯片等其他基因分析应用的基因扩增,适合国内外各种PCR试剂盒传染病类(各型肝炎病毒、结核杆菌、STD性传播疾病、优生优育、支原体、衣原体、寄生虫等)、肿瘤类(P53、幽门螺杆菌等)、科研类(遗传鉴定、细菌病毒分型等)。

3. dna抽提液的作用

主要成分是:NaCl,Tris-HCl(PH=8),EDTA(PH=8),SDS.NaCl,Tris-HCl主要是调节溶液的PH,维持一定的离子浓度.EDTA主要是二价金属离子的螯合剂,使影响DNA的DNA酶中的钙离子和镁离子和EDTA结合,使酶失去活性,有利于提取完整DNA;SDS主要是和蛋白质结合,使其变形沉淀,从而利于DNA的提取,减少和清除带白质杂质!

4. dna抽提的原理

强碱性条件下,质粒DNA和基因组DNA同时从细胞中释放出来,并发生变性。

在pH中性,并有高盐浓度存在的条件下,质粒DNA会迅速发生复性,仍为可溶性状态,染色体DNA之间交联形成不溶性网状结构,在去垢剂SDS作用下,染色体DNA与变性蛋白质和细胞碎片结合形成沉淀,通过离心去除沉淀后,再用酚氯仿抽提进一步纯化质粒DNA,用异丙醇或乙醇沉淀可将之纯化出来。

5. 试剂盒抽提dna的基本原理

原理就是去掉植物细胞壁

细胞膜

质体

线粒体

叶绿体

剩下细胞核了。就是DNA了。

通常采用机械研磨的方法破碎植物的组织和细胞,由于植物细胞匀浆含有多种酶类(尤其是氧化酶类)对DNA的抽提产生不利的影响,在抽提缓冲液中需加入抗氧化剂或强还原剂(如巯基乙醇)以降低这些酶类的活性。在液氮中研磨,材料易于破碎,并减少研磨过程中各种酶类的作用。

十二烷基肌酸钠(sarkosyl)、十六烷基三甲基溴化铵(hexadyltrimethyl

ammomum

bromide,简称为CTAB)、十二烷基硫酸钠(sodium

dodecyl

sulfate,简称SDS)等离子型表面活性剂,能溶解细胞膜和核膜蛋白,使核蛋白解聚,从而使DNA得以游离出来。再加入苯酚和氯仿等有机溶剂,能使蛋白质变性,并使抽提液分相,因核酸(DNA、RNA)水溶性很强,经离心后即可从抽提液中除去细胞碎片和大部分蛋白质。上清液中加入无水乙醇使DNA沉淀,沉淀DNA溶于TE溶液中,即得植物总DNA溶液

6. dna提取实验分析及讨论

孵育一般指的就是静置,经常会见到,多少度孵育多少时间,这就是指在特定温度下,将混合的样品静置,这就叫做孵育。

7. dna抽提过程中应注意什么问题

CTAB (Cetyl trimethyl ammonium bromide)法是一种常用的植物组织或真菌等含有多种多酚类物质的样品提取基因组DNA的方法。下面是CTAB法提取DNA的详细步骤:

1. 样品制备:取适量样品(如叶片、茎秆等),快速清洗去除表面杂质,并迅速切碎至0.5cm左右大小。

2. 组织破碎:将组织样品加入研钵中,加入冰冷的CTAB缓冲液(含0.7M NaCl, 100mM Tris-HCl(pH8.0),20mM EDTA(pH8.0),1% CTAB(w/v)),按照比例为1:3~4(组织样品:CTAB缓冲液)混合,用液氮或搅拌器将其研磨成均匀浆状物。

3. 组织裂解:将裂解后的样品转移至离心管中,加入等体积的氯仿和异戊醇,轻轻摇匀离心管,使液体混合均匀,然后静置样品,待上层水相变得透明,下层蛋白质和其他杂质沉淀于离心管底部。

4. DNA提取:将上清液吸出,加入冷的95%乙醇,轻轻搅拌使其充分沉淀DNA,然后离心10~15min,去除上清,用70%乙醇洗涤一遍,再次离心去除上清,将干燥的DNA沉淀中加入去离子水或TE缓冲液中溶解即可。

5. 检测DNA品质:将提取的DNA样品用紫外线分光光度计进行检测,根据A260/A280比值评估DNA纯化程度和可能存在的其他污染物。

注意事项:

1. CTAB缓冲液中CTAB的浓度应控制在1%(w/v)以下,高浓度会影响DNA的纯化效果。

2. 样品细胞量应在10mg以上,过少会影响DNA提取量。

3. 在操作中要尽可能避免嵌合等细菌或真菌在样品中的污染。

4. 在操作过程中要严格遵守无菌技术操作规范,以避免污染、降低提取DNA的纯度和完整性。

8. 抽dna步骤

DNA的提取方法

一.酚抽提法:先用蛋酶K、SDS破碎细胞,消化蛋白,然后用酚和酚-氯DNA大小为100-150kb

二.甲酰胺解聚法:破碎细胞同上,然后用高浓度甲酰胺解聚蛋白质与DNA的结合,再透析获得DNA可得DNA200kb左右。

三.玻璃棒缠绕法:用盐酸胍裂解细胞,将裂解物铺于乙醇上,然后用带钩或U型玻璃棒在界面轻搅,DNA沉淀液绕于玻棒。生成DNA约80kb。

四.异丙醇沉淀法:基本同1法,仅用二倍容积异丙醇替代乙醇,可去除小分子RNA(在异丙醇中可溶状态)

五.表面活性剂快速制备法:用Triton X-100A或NP40表面活性剂破碎细胞,然后用蛋白酶K或酚去除蛋白,乙醇沉淀或透析。

六.加热法快速制备:加热96℃-100℃,五分钟,然后离心后取上清,可用于PCR反应。

七.碱变性快速制备:先用NaOH作用20分钟,再加HCI中和,离心后取上清,含少量DNA。

9. dna的提取和检测实验

DNA提取是从细胞中分离和纯化DNA的过程。下面是一种常见的基本方法。

实验步骤:

1. 从含有DNA的样本(比如血液、细菌、植物等)中采集细胞并将其释放到一个离心管中。

2. 加入细胞裂解液,用来破坏细胞壁和细胞膜,释放出细胞内的DNA。

3. 加入蛋白酶,将细胞内的蛋白质降解掉。通常使用丝氨酸蛋白酶或蛋白酶K。

4. 加入盐,使得DNA与其他细胞成分分离。盐可以使DNA形成一个粘稠的团块,从而方便分离和纯化。

5. 加入冷酒精,使得DNA在酒精中沉淀并凝聚成片。通常使用70%的乙醇或异丙醇。

6. 使用微量孔径滤器或离心机进行分离和纯化,去除其它杂质,使DNA得以分离和纯化。

注意事项:

1. 在实验中使用的工具和材料要彻底消毒,以避免细菌和其他污染物的干扰。

2. 在实验过程中要保持样品温度低,以防止DNA分解。

3. 在实验过程中,不能使用过多的酒精或其他重质组分,否则DNA可能会被破坏。

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